[1]储卫华,等.天蚕素A-蜂毒素杂合肽基因表达载体的构建及其分泌表达[J].南京理工大学学报(自然科学版),2007,(02):257-260.
 CHU Wei-hua,LI Da-li,WANG Xin.Cloning and Expression of Synthetic Gene Encoding Cecropin A-melittin Hybrid Peptide in Pichia Pastoris[J].Journal of Nanjing University of Science and Technology,2007,(02):257-260.
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天蚕素A-蜂毒素杂合肽基因表达载体的构建及其分泌表达
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《南京理工大学学报》(自然科学版)[ISSN:1005-9830/CN:32-1397/N]

卷:
期数:
2007年02期
页码:
257-260
栏目:
出版日期:
2007-04-30

文章信息/Info

Title:
Cloning and Expression of Synthetic Gene Encoding Cecropin A-melittin Hybrid Peptide in Pichia Pastoris
作者:
储卫华1 2 李大力2 汪 信2
1. 中国药科大学生命科学与技术学院, 江苏南京210009; 2. 南京理工大学化工学院, 江苏南京210094
Author(s):
CHU Wei-hua12LI Da-li2WANG Xin2
1.School of Life Science and Technology,China Pharmaceutical University,Nanjing 210009,China;2.School of Chemical Engineering,NUST,Nanjing 210094,China
关键词:
抗菌肽 天蚕素A 蜂毒素 毕赤氏酵母 分泌表达
Keywords:
ant ibacteria l peptide cecrop in A melittin yeast expression
分类号:
Q78
摘要:
根据天蚕素A ( cecrop in A, CA ) N端第1- 8个氨基酸残基和蜂毒素(m elittin, ME ) N 端第1- 18个氨基酸残基, 用化学合成法合成了以酵母偏爱密码子编码的杂合肽CA ( 1- 8)ME ( 1 - 18)基因。DNA 序列分析表明, 合成的基因与设计的一致。该基因插入毕赤氏酵母整合型质粒pPIC9K 中, 置于AOXⅠ启动子的控制下, 并通过电转化将重组质粒pPIC9K-came导入P ich ia pastoris SMD1168宿主菌, 在含有G418的YEPD 平板上筛选整合型的多拷贝的转化子, 转化子在BMMY培养基中经甲醇诱导表达, 发现Tric ine-SDS-PAGE 有明显条带。比浊法初步测定表明, 表达产物came对E. co li DH5A具有抗菌活性。
Abstract:
A hybrid peptide gene was designed and synthesized. Its encoding pept ide is constructed from residues 1- 8 o f cecrop in and residues 1- 18 ofmelittin. The came genew as cloned into plasm ids pPIC9K under the contro l ofAOXⅠ and transformed intoP ichia pastoris SMD 1168 stra in by the electroporat ion. By DNA sequenc ing, thewhole sequences o f th is gene are conf irmed correc.t The positive clones w ere identified on YEPD plates contain ing G418 and cultivated in BMMY medium. A fter be ing induced by methano,l a pro tein band can be seen w ith Tric ine-SDS-PAGE. The antibacterial activ ity assay of the product was carried out in a liqu id turb iditymethod and the supernatant o f recombinat ion P ichia pastoris SMD1168 / pPIC9K-came w as exh ib ited to inhibitE. coli DH5α

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备注/Memo

备注/Memo:
基金项目: 江苏省博士后基金( 2004144), 南京理工大学优秀博士基金
作者简介: 储卫华( 1971- ) , 男, 江苏东台人, 副教授, 博士, 主要研究方向: 微生物与免疫学, 生物工程, E-ma il:chuw e ihua2002@ yahoo. com. cn。
更新日期/Last Update: 2007-04-30